Down-regulation of miR-153-3p attenuates H2O2-induced H9C2 cell injury by promoting Nrf2 expression

AIM To study the effect of microRNA-153-3p (miR-153-3p) knock-down on oxidative injury of H9C2 cells induced by H₂O₂ and its specific mechanism. METHODS The oxidative stress injury of H9C2 cell model was induced by H₂O₂, and then the cell viability and the expression of miR-153-3p were detected by MTT assay and RT-qPCR, respectively. The effects of miR-153-3p knock-down on the H9C2 cell injury under oxidative stress were studied by RNA interference technology. The targets of miR-153-3p were identified by Western blot and dual-luciferase reporter assay. RESULTS MTT assay showed that the viability of H9C2 cells was decreased with the increase in H₂O₂ concentration (P<0.05). The results of RT-qPCR showed that the expression of miR-153-3p was increased with the increase in H₂O₂ concentration (P<0.05). Knock-down of miR-153-3p increased the viability of H9C2 cells under oxidative stress, decreased the cell apoptosis and the content of malondialdehyde (MDA), and increased the activity of superoxide dismutase (SOD). The expression of nuclear factor E2-related factor 2（Nrf2） and antioxidant response element（ARE） activity were increased with the increase in H₂O₂ concentration (P<0.01). TargetScan analysis and dual-luciferase reporter assay showed that Nrf2 was one of the potential target genes of miR-153-3p. The results of Western blot further showed that over-expression of miR-153-3p inhibited the expression of Nrf2 (P<0.01), while down-regulation of miR-153-3p increased the expression of Nrf2 (P<0.01). Dual interference with Nrf2 and miR-153-3p significantly reduced H9C2 cell viability， promoted the apoptosis, increased MDA content, and decreased SOD activity in the presence of H₂O₂ (P<0.01). CONCLUSION Inhibition of miR-153-3p expression attenuates the injury of H9C2 cells induced by H₂O₂ through up-regulating Nrf2/ARE signaling pathway.     

Role of endoplasmic reticulum stress in trimethylamine N-oxide-induced oxidative stress in human umbilical vein endothelial cells

AIM: To investigate whether endoplasmic reticulum stress is involved in trimethylamine N-oxide (TMAO)-mediated oxidative stress in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). METHODS: The cell viability was examined by CCK-8 assay. The cells were stained by DCFH-DA, and the intracellular level of reactive oxygen species (ROS) was observed by phase-contrast microscopy and detected by flow cytometric analysis. The protein levels of phospho-IRE-1α, IRE-1α and GRP78/BiP were detected by Western blot. RESULTS: TMAO exerted no significant effect on the viability of HUVECs. For a long period (>24 h), even a low concentration (10 μmol/L) of TMAO increased the oxidative stress level in the HUVECs (P<0.05). TMAO increased the phosphorylation level of IRE-1α and significantly up-regulated the protein level of GRP78/BiP in HUVECs (P<0.01). Pretreatment with STF-083010, an inhibitor of IRE1α, for 1 h reduced TMAO-induced oxidative stress in HUVECs (P<0.05). CONCLUSION: Endoplasmic reticulum stress is involved in TMAO-induced oxidative stress in HUVECs.     

中国板栗238份品种（系）叶片形态、解剖结构及其抗旱性评价

采用多功能图像分析法、冷冻切片法和指甲油印记法，对238份板栗品种（系）叶片的形态、解剖结构及气孔特征进行了观察测量，运用变异系数、主成分分析对33项指标进行了筛选，后运用隶属函数法进行抗旱性综合评价。结果表明：（1）238份板栗品种（系）33项指标中除上表皮角质层厚度、上表皮细胞宽度、第一层栅栏组织细胞密度、第一层栅栏组织细胞宽、下表皮细胞宽度和下表皮角质层厚等6项指标的变异系数小于10%，各品种系（间）差异较小外，其余27项指标的变异系数均大于10%，在各品种（系）间差异较大；经主成分分析从27项指标中筛选出10项作为238份板栗品种（系）抗旱性综合评价的典型指标。（2）利用隶属函数分析将238份品种（系）划分为4类：第Ⅰ类包括31个品种（系），平均隶属值为0.60 ~ 0.80，抗旱性极强；第Ⅱ类包括48个品种（系），平均隶属值为0.50 ~ 0.59，抗旱性强；第Ⅲ类包括84个品种（系），平均隶属值为0.30 ~ 0.49，抗旱性中；第Ⅳ类包括75个品种（系），平均隶属值为0.20 ~ 0.29，抗旱性弱。     

长江口盐沼湿地鱼类群落优势种的时空生态位特征

为了解长江口盐沼湿地优势鱼类群落结构及其种间关系，采用插网调查，利用2019年5—10月的调查数据，基于生态位宽度和生态位重叠度指数对长江口崇明东滩（31°27''N，121°56''E）和九段沙盐沼湿地（31°10''N，121°57''E）鱼类群落的优势种生态位进行研究。研究结果表明，春、夏、秋3个季节共采获10个优势种，其中鮻（Liza haematocheila）、花鲈（Lateolabrax maculatus）和拉氏狼牙虾虎鱼（Odontamblyopus rubicundus）在3个季节中均为优势种。在10个优势种中，时间生态位宽度值变化范围为0.11~1.70，其中拉氏狼牙虾虎鱼时间生态位宽度值最大，小黄鱼（Larimichthys polyactis）值最小；空间生态位宽度值变化范围为0.57~1.53，其中棱鮻（Liza carinatus）空间生态位宽度值最大，小黄鱼值最小。长江口盐沼湿地鱼类优势种生态位宽度呈现显著的季节性变化趋势。长江口盐沼湿地鱼类优势种的时空生态位重叠值较高，其中具重叠意义的鱼种对（species pairs）高达73.33%，具有显著重叠意义的鱼种对高达48.89%。结论认为，长江口盐沼湿地鱼类优势种的时空分布具有相似性，存在明显的竞争关系。     

全基因组选择信号揭示绒山羊绒毛性状相关的候选基因

旨在对辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊的基因组选择信号进行筛选。本研究利用Illumina 50K的山羊芯片，对内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊和黄淮山羊进行基因型检测，质控后获得50 010个共同SNPs位点。通过群体分化系数Fst和XP-EHH，以黄淮山羊为参考群体分别对内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊进行选择信号检测，Fst和XP-EHH值的top 5%作为阈值。结果，利用Fst在绒山羊基因组中筛选到501个候选基因，利用XP-EHH在绒山羊基因组中筛选到145个候选基因。其中有12个SNPs在绒山羊基因组中受到较强选择。通过基因注释筛选到21个候选基因，包括EXOC4、ASIC2、PCDH9、RHBDD1、IRS1和PDE10A等。这些基因主要富集在PI3K-Akt信号通路、蛋白质消化吸收和松弛素信号通路等。研究结果发现，绒山羊在驯化过程中其基因组很多与毛囊相关的基因受到了强烈的选择。这些发现也有助于更好地了解绒山羊的选择进展，为中国绒山羊品种的种质资源保护和利用提供重要参考。     

猪lncRNA TCONS_00791383对骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

为了探究lncRNA TCONS_00791383对猪骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。本研究利用qRT-PCR技术检测出生7 d内大白仔猪6种组织（心、脾、肺、肾、背肌和腿肌）以及猪骨骼肌卫星细胞增殖分化前后TCONS_00791383的表达水平；通过设计反义核苷酸（antisense oligonucleotides，ASO）片段在猪骨骼肌卫星细胞中对TCONS_00791383进行敲低，检测敲低TCONS_00791383之后增殖分化标志基因的表达量变化；通过trans （co-expression）对TCONS_00791383进行靶基因预测，使用DAVID对其进行GO富集和KEGG通路分析。结果显示，TCONS_00791383在猪心脏中表达量最高，在脾和肾组织中不表达。在骨骼肌卫星细胞从增殖到分化的过程中，TCONS_00791383的表达量逐渐上升，且在分化后30 h表达量达到最高。在使用ASO片段敲低TCONS_00791383之后，与对照组相比，在分化24 h，增殖标志基因Pax3、Pax7表达量显著或极显著降低（P<0.05，P<0.01），分化标志基因MyoG表达量极显著降低（P<0.01），在分化48 h，增殖标志基因Pax3表达量极显著降低（P<0.01），Pax7表达量显著降低（P<0.05），分化标志基因MyHC表达量显著降低（P<0.05）。预测得到的相关靶基因富集到AMPK、ATP等多个与骨骼肌卫星细胞增殖和分化过程相关的重要信号通路。本研究表明，lncRNA TCONS_00791383可能促进猪骨骼肌卫星细胞的增殖和分化。     

miR-106b-5p靶向KLF4调控山羊肌内前体脂肪细胞分化

旨在明确miR-106b-5p对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响，并确定这种作用是通过靶向KLF4来实现的。本研究利用实时荧光定量PCR （quantitative real-time PCR，qRT-PCR）技术检测miR-106b-5p在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式，通过脂质体转染技术将miR-106b-5p mimic和miR-106b-5p inhibitor转入体外培养的山羊肌内前体脂肪细胞，油红O染色法从形态学验证miR-106b-5p对脂肪细胞中脂滴积聚的影响，qRT-PCR检测预测的靶标基因KLF4和脂肪分化标志基因的表达情况，利用双荧光素酶报告系统鉴定miR-106b-5p与KLF4的靶标关系。qRT-PCR结果显示，miR-106b-5p在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化第3天时表达量最高。在山羊肌内脂肪细胞中干扰miR-106b-5p后油红O染色显示脂滴聚积减少，过表达miR-106b-5p后脂滴聚积增加。在山羊肌内前体脂肪细胞中转染miR-106b-5p inhibitor后PPARγ表达量显著降低（P<0.05），而KLF4表达量极显著升高（P<0.01）；转染miR-106b-5p mimic后LPL和PPARγ表达量极显著升高（P<0.01）。荧光素酶活性试验结果显示，过表达miR-106b-5p可显著抑制KLF4荧光活性。miR-106b-5p通过靶向并负调节KLF4的表达促进山羊肌内脂肪细胞分化。     

蜂胶对细菌脂多糖刺激下奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接蛋白的影响

本试验旨在研究中国蜂胶乙醇提取物（ethanol extract of Chinese propolis，EECP）对细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接渗透性的影响。EECP中总酚酸和总黄酮含量测定采用福林酚法和硝酸铝法，并建立LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，MAC-T）炎症模型，采用CCK-8法测定EECP对MAC-T相对增殖率的影响，利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）评估EECP对LPS诱导的MAC-T细胞炎症相关因子（IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β）相对mRNA转录水平；以及对紧密连接蛋白（occludin、ZO-1）相对mRNA转录水平进行检测，并进一步利用免疫荧光技术对紧密连接膜蛋白进行定位，确定EECP对LPS诱导MAC-T细胞炎症紧密连接渗透性的影响。结果显示：EECP中总酚酸含量为106.35 mg没食子酸当量（GAE）·g^-1、总黄酮含量为320.85 mg芦丁当量（RE）·g^-1；CCK-8结果显示EECP的安全浓度为0~15 μg·mL^-1，并可有效提高LPS刺激下MAC-T的活力；LPS刺激显著增加了细胞炎症相关因子IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β mRNA的转录量（P<0.001）；但2.5~15.0 μg·mL^-1 EECP预处理显著降低了IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β mRNA的转录量；与此类似，LPS刺激显著抑制了紧密连接蛋白基因（occludin、ZO-1）mRNA的转录量（P<0.01），而EECP预处理后紧密连接蛋白基因（occludin和ZO-1）mRNA的转录量显著增加（P<0.05）；免疫荧光染色试验也证实EECP能通过上调紧密连接蛋白（occludin、ZO-1）的表达，缓解LPS诱导的乳腺上皮细胞屏障功能紊乱。该结果证实，EECP对细菌脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症具有良好的保护作用，这为利用中国蜂胶预防奶牛乳腺炎提供了试验基础。     

3种遥感产品检测黄土高原森林变化及差异比较

基于Landsat Vegetation Continuous Fields（LVCF）、MODIS Vegetation Continuous Fields（MVCF）和MODIS Land Cover（MODLC）等遥感产品和森林清查数据（NFI）检测2000-2015年黄土高原森林分布及变化。结果表明:1）2000-2015年黄土高原森林覆盖度升高，基于LVCF和MVCF的全区森林覆盖度均值分别由2000年的7.8%和9.6%增加到2015年的9.7%和13.2%。2）遥感产品估算的森林分布空间格局和面积差异较大，基于LVCF、MVCF和MODLC估算的黄土高原森林面积在2000年分别为726.6×10⁴、604.7×10⁴ hm²和325.1×10⁴ hm²，2015年分别为926.2×10⁴、998.3×10⁴ hm²和400.1×10⁴ hm²。3）遥感产品估算的省级尺度上森林面积与NFI的不一致性因省份和年份而异，LVCF与NFI一致性整体略优于MVCF，MODLC与NFI差异最大且估算的森林面积远低于LVCF、MVCF和NFI。4）遥感产品检测的陕西和山西2省的森林面积增加值与NFI一致性高于宁夏；基于遥感产品估算的宁夏森林面积及增加幅度均远低于NFI。